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如何選擇同型對照抗體？
來源：菲恩生物 發(fā)布時間：2023-07-28 10:32 點(diǎn)擊量：
一、什么是同型對照抗體?
如果使用未標(biāo)記一抗和標(biāo)記二抗，那么同型對照需要選擇和一抗相同來源，相同亞型的抗體，如果使用直接標(biāo)記的一抗，那么同型對照還需要和一抗有相同的標(biāo)記物。
采用和一抗實(shí)驗(yàn)濃度相同的同型對照，以獲得正確的結(jié)果分析。
如果沒有找到適合的同型對照，在保持來源相同、熒光標(biāo)記相同、免疫球蛋白類別相同條件下，那么優(yōu)先選擇的順序應(yīng)該是亞鏈不同－－亞型不同——相同類別。
比如，某種的抗體的來源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型對照表里面找到不到完全相同的同型對照，那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記Mouse IgG2а為同型對照。如果也沒有找到Mouse IgG2а，那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2b作為同型對照。如果最后還是沒有找到Mouse IgG2b，那么選者相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2作為同型對照。
同型對照(Isotype Control)指與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性結(jié)合而產(chǎn)生的背景信號。
二、為什么使用同型對照?
抗體在結(jié)構(gòu)上都極其相似，大部分是恒定區(qū)，只有一小部分可變區(qū)不同，決定其與抗原的特異性結(jié)合?？贵w分子結(jié)構(gòu)的恒定區(qū)由保守區(qū)構(gòu)成，在同型的抗體中其序列往往相同。
而抗體保守區(qū)是決定抗體作用機(jī)制的關(guān)鍵，其中的Fc region能參與調(diào)控并結(jié)合各類細(xì)胞上的Fc受體。所以同型對照(Isotype Control)可用于消除由于抗體非特異性與細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生的假陽性干擾。同型對照也是陰性對照，其主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的，而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。
三、同型對照用于哪些實(shí)驗(yàn)？
1.流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
同型對照一直是流式細(xì)胞術(shù)中最常用的陰性對照之一。同型對照可模擬FcR或其他蛋白非特異性結(jié)合和染色，還可以用于設(shè)定流式細(xì)胞儀的電壓，有效節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。
染色方式為：樣本管：一抗+樣本，同型對照管：同型對照+樣本。
在以下情況中，實(shí)驗(yàn)人員必須使用同型對照確保流式實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性：
● 實(shí)驗(yàn)人員流式經(jīng)驗(yàn)較少
● 進(jìn)行胞內(nèi)蛋白流式實(shí)驗(yàn)，針對細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)的抗體即使不與抗原結(jié)合，也常常會出現(xiàn)被攔在細(xì)胞內(nèi)。
● 實(shí)驗(yàn)不常見或特異性不高的抗體
2.免疫熒光和免疫組化，當(dāng)同型對照的顯色信號弱于特異性抗體，才能說明是抗體和樣本中的目標(biāo)蛋白結(jié)合。
3.IP（免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)，下圖的control IgG為同型對照，同型對照樣本只能檢測到抗體的重鏈條帶，沒有目的蛋白條帶。
4.Elisa實(shí)驗(yàn)檢測某種特異抗體時，可用同型對照排除非特異結(jié)合。
四、如何選擇同型對照？
采用和一抗實(shí)驗(yàn)濃度相同的同型對照，以獲得正確的結(jié)果分析。
如果沒有找到適合的同型對照，在保持來源相同、熒光標(biāo)記相同、免疫球蛋白類別相同條件下，那么優(yōu)先選擇的順序應(yīng)該是亞鏈不同－－亞型不同——相同類別。
比如，某種的抗體的來源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型對照表里面找到不到完全相同的同型對照，那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記Mouse IgG2а為同型對照。如果也沒有找到Mouse IgG2а，那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2b作為同型對照。如果最后還是沒有找到Mouse IgG2b，那么選者相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2作為同型對照。
菲恩生物同型對照產(chǎn)品如下
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
| FNSA-0130 | Normal mouse IgG Control |
| FNSA-0131 | Chicken IgY-Isotype Control |
| FNSA-0133 | Goat IgG-Isotype Control |
| FNSA-0134 | Rat IgG-Isotype Control |
| FNSA-0109 | Normal Human IgG Control |
| FNSA-0106 | Normal Rabbit IgG Control |
