服務(wù)熱線
15623758226
提高單抗融合率的6大影響因素
來源：菲恩生物 發(fā)布時(shí)間：2020-07-17 13:43 點(diǎn)擊量：
剛開始做單抗的時(shí)候難免會(huì)碰到細(xì)胞融合不成功或者是融合率比較低的情況，現(xiàn)在小編就總結(jié)幾點(diǎn)影響融合率的因素，希望能夠?qū)ψ鰧?shí)驗(yàn)的科研工作者有點(diǎn)幫助。
1.融合之前一定要取小鼠血檢測(cè)效價(jià)，效價(jià)高于2萬才比較適合做融合，低于2W效價(jià)的融合效果可能會(huì)不太理想。
2.骨髓瘤細(xì)胞SP2/0的狀態(tài)很重要，一定要保證細(xì)胞狀態(tài)非常好、無污染、大面積死亡現(xiàn)象，融合前一定要保持細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
3.融合使用的PEG、胎牛血清質(zhì)量直接決定了融合率高低，對(duì)不同品牌、批號(hào)的產(chǎn)品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選，選擇質(zhì)量最好的PEG、胎牛血清能有效保證融合成功率。
4.融合時(shí)SP2/0與脾細(xì)胞的比例也需要注意，雖然10:1-1:10都能融合成功，但最佳的融合效率一般在2:1-1:2之間。無論何種比例，融合時(shí)一定要保證2種細(xì)胞都不含血清成分并充分混勻在一起，融合過程中要始終保持融合管旋轉(zhuǎn)，滴加PEG及終止融合時(shí)都應(yīng)遵循先慢后快的原則，避免對(duì)細(xì)胞沖擊過大。
5.飼養(yǎng)層細(xì)胞這個(gè)因素也會(huì)影響融合效果，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞、胸腺細(xì)胞等都可以作為雜交瘤的飼養(yǎng)細(xì)胞，其中以腹腔巨噬細(xì)胞為最佳。同時(shí)，每孔的飼養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量也需要注意，過多會(huì)爭(zhēng)奪培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)使雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)難以維繼，過少會(huì)起不到飼養(yǎng)層的作用，所以需要保持在一個(gè)合理范圍內(nèi)才能起到良好的效果。
6.合理的使用一些添加劑產(chǎn)生事半功倍的效果，例如本公司自行研制的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，可以有效延長(zhǎng)培養(yǎng)基使用壽命、提高雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)速度、提高融合率，在實(shí)驗(yàn)條件不太理想時(shí)也能保持較高的融合效率。
當(dāng)然影響融合率的還有一些其他因素，比如融后每孔細(xì)胞鋪的數(shù)量多少、離心轉(zhuǎn)速及時(shí)間、吹打細(xì)胞力度等都會(huì)產(chǎn)生一定影響，實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中就得靠我們多加注意積累經(jīng)驗(yàn)，自然熟能生巧，水到渠成了。
