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菲恩生物預(yù)吸附二抗實(shí)驗(yàn)原理

來(lái)源:菲恩生物   發(fā)布時(shí)間:2020-05-05 16:06   點(diǎn)擊量:

對(duì)于經(jīng)常進(jìn)行抗體檢測(cè)工作的人來(lái)說(shuō),非特異性結(jié)合和背景著色常常是一大困擾,某些情況下二抗存在交叉反應(yīng)是主要原因。

二抗,即第二抗體,是能和抗體結(jié)合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測(cè)抗體的存在,放大一抗的信號(hào)。二抗的制備一般是利用抗體是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì),去免疫異種動(dòng)物,由異種動(dòng)物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對(duì)于此抗體的免疫球蛋白。因此二抗實(shí)際上也是多抗,本身的特性決定了其大概率會(huì)存在交叉反應(yīng)。

針對(duì)這一問(wèn)題,我們可以在制備二抗時(shí)添加一步預(yù)吸附的純化步驟,以提高抗體的特異性?;驹硎菍⒍沽鹘?jīng)固定有潛在交叉反應(yīng)的物種的血清蛋白的基質(zhì)柱,有非特異性結(jié)合的二抗會(huì)留在柱中,而特異性高的二抗將通過(guò)基質(zhì)柱。

預(yù)吸附二抗基本原理

經(jīng)過(guò)預(yù)吸附處理的二抗能有效降低非特異性背景,尤其在多重染色實(shí)驗(yàn)和樣本中內(nèi)源性免疫球蛋白(Igs)含量高的IHC實(shí)驗(yàn)時(shí)效果更好。

多重染色實(shí)驗(yàn)時(shí),由于同時(shí)使用多個(gè)一抗和對(duì)應(yīng)的二抗,每種二抗有和其他一抗之間交叉反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。例如同時(shí)使用兔抗和小鼠抗進(jìn)行雙染實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)使用針對(duì)小鼠血清預(yù)吸附的抗兔二抗,和針對(duì)兔血清預(yù)吸附的抗小鼠二抗。

而IHC實(shí)驗(yàn)中如果所用樣本中內(nèi)源性免疫球蛋白(Igs)含量高,二抗也有與樣本本身免疫球蛋白交叉反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。如對(duì)人組織樣本進(jìn)行染色時(shí),應(yīng)使用對(duì)人血清預(yù)吸附的HRP二抗。

菲恩生物提供的抗體種類(lèi)廣泛,涵蓋了腫瘤、神經(jīng)生物學(xué)、肝細(xì)胞、信號(hào)傳道、表觀遺傳學(xué)、心血管生物學(xué)、免疫學(xué)、代謝、細(xì)胞生物學(xué)等研究領(lǐng)域,還包括單克隆抗體、多克隆抗體、標(biāo)記的抗體和未標(biāo)記的抗體。其中多克隆抗體是經(jīng)過(guò)抗原親和純化的特異性IgG。菲恩生物提供10,000多種抗體產(chǎn)品,可用于大多數(shù)動(dòng)物物種。

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