IP實驗原理
IP又稱免疫沉淀(Immunoprecipitation),是利用抗原和抗體的特異性結合以及“proteinA/G”特異性結合到抗體的FC片段的現(xiàn)象開發(fā)出來的方法,簡單來說,抗原與抗體類似于鎖和鑰匙之間的關系,一把鑰匙(抗體)只能開一把鎖(抗原),而鑰匙可以通過鑰匙鏈(細菌蛋白的“proteinA/G”)快速找到。ProteinA/G抗體-目的蛋白復合物從混合液中沉淀下來,最后將靶蛋白從磁珠上洗脫,并通過SDS-PAGE,Western Blot等手段對洗脫下來的蛋白進行分析。
IP是用來富集目的蛋白的,那么在生物體內蛋白一般可能會與什么結合呢?
這個我想大家都知道,那就是DNA、RNA、蛋白質。通過IP的方法富集蛋白,檢測與其結合的DNA的方法即為ChIP;通過IP的方法富集蛋白,檢測與其結合的RNA的方法即為RIP;通過IP的方法富集蛋白,檢測與其結合的蛋白的方法即為coIP。
CoIP又叫免疫共沉淀,利用抗原A與蛋白質B結合,通過A的抗體(鑰匙)沉淀A(鎖),再利用精制的proteinA(鑰匙鏈)預先結合到磁珠上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應后,磁珠上的proteinA就能吸附抗體,從而獲得抗原A與抗原B的結合體,之后就可以對B檢測,獲得蛋白質之間的相互作用信息。
RIP又叫RNA免疫沉淀,利用抗原A與RNA B結合,抗原A的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來,經(jīng)過分離純化對RNA進行測序或PCR分析,就可以獲得RNA與蛋白相互作用的信息。
CHIP又叫染色質免疫共沉淀,利用抗原A與DNA B結合,抗原A的抗體把相應的DNA-蛋白復合物沉淀下來,經(jīng)過分離純化對目的DNA片段分析,就可以獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。