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發(fā)布時間：2020-10-15 13:46?? 咨詢量：
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產(chǎn)品詳情
| 名稱： | Mouse-DAB (Poly-HRP) Detection IHC Kit | ||||||||||||||||||||
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| 貨號： | IHC0008 | ||||||||||||||||||||
| 工作液的準備： | √ IHC系統(tǒng)中可以使用許多不同的緩沖液。最常見的一種是10 mM磷酸鹽緩沖液，pH 7.4，0.9％的磷酸鹽緩沖液（PBS）。PBS-T（PBS + 0.1％Tween 20） √ 一抗工作液：根據(jù)供應(yīng)商提供的稀釋比例。 √ 阻斷血清和多聚HRP山羊抗小鼠Ig G：即用型 √ DAB工作溶液（1ml）：在EP管中混勻50ul試劑A，50ul試劑B和900ul DAB底物。使用時，最好在20分鐘內(nèi)使用DAB工作溶液 √ 配置表
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| 試劑： |
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| 免疫組化染色介紹： | 菲恩生物采用了新的聚合酶標記系統(tǒng)（多聚HRP標記山羊抗小鼠IgG）。更多的酶將通過臂結(jié)構(gòu)連接至一個抗體。同時，新系統(tǒng)的理想結(jié)構(gòu)增強了免疫化學(xué)過程中的信號，減少了實驗步驟。 | ||||||||||||||||||||
| 石蠟切片的染色步驟： | 1通過二甲苯或其他清潔劑和分級酒精系列對組織切片進行脫蠟和水化處理。
2.在自來水中沖洗5分鐘。 3.如果需要淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性，則將切片在0.3％H2O2的甲醇或水中孵育30分鐘。通過使用更高濃度的H2O2可以縮短孵育時間。如果內(nèi)源性過氧化物酶活性沒有問題，則可以刪除步驟3。 4.在緩沖液中洗滌5分鐘。 5.在37℃下用封閉血清孵育切片1小時 6.從切片上吸干多余的阻斷血清。 7.將一抗在PBS緩沖液中稀釋，在37℃下孵育切片1小時，在4℃下過夜孵育。（如果發(fā)生背景染色，則可以在含有0.1％BSA的緩沖液中稀釋一抗，請參見注釋3、5） 8.在PBST緩沖液中洗滌載玻片3分鐘。 9.將切片與多HRP山羊抗小鼠Ig G在37℃孵育1小時。 10.在PBST緩沖液中洗滌載玻片3分鐘。 11.在DAB工作液中孵育切片，直到形成所需的染色強度。（見注2） 12.用自來水沖洗切片。 13.復(fù)染，清洗并封片。 | ||||||||||||||||||||
| 注意事項： | 1.不應(yīng)使用含有疊氮化鈉或其他過氧化物酶活性抑制劑的溶液。
2.顯影時間可能會因抗原水平，所需染色劑的強度或所用底物而異。DAB一般應(yīng)顯色2-10分鐘；AEC 10-30分鐘；TMB 5-20分鐘。由于反應(yīng)產(chǎn)物的溶解性或缺乏色彩對比，某些復(fù)染可能與某些過氧化物酶底物不兼容?？筛鶕?jù)要求提供復(fù)染色兼容性表。 3.僅應(yīng)使用免疫組化等級BSA，因為其他制劑可能含有不需要的雜質(zhì)。稀釋這些試劑可能需要更長的孵育時間和/或更高的孵育溫度，以實現(xiàn)最大的靈敏度。 4.該部分應(yīng)做好準備。固定（通常在甲醛含量不超過4％的福爾馬林緩沖液中）應(yīng)在整個染色過程中保持切片的完整性，但又不至于破壞所研究的抗原。在染色過程中，請勿使切片變干。使用加濕箱進行孵育。 5.為了避免抗體吸附到最終稀釋的塑料或玻璃容器中，可以將初級抗體稀釋在含有0.1％免疫組化級牛血清白蛋白的緩沖液中。 6.孵育時間可能會縮短。如果切片中的抗原濃度較高，建議與一抗，二抗和DAB試劑的孵育時間會減少。如果抗原濃度低，則可以延長步驟7和9以實現(xiàn)最大程度的染色 |
