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（多聚HRP）兔IgG-DAB檢測(cè)試劑盒
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產(chǎn)品詳情
| 名稱： | Rabbit-DAB (Poly-HRP) Detection IHC Kit | ||||||||||||||||||||
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| 貨號(hào)： | IHC0007 | ||||||||||||||||||||
| 工作液的準(zhǔn)備： | √ IHC系統(tǒng)中可以使用許多不同的緩沖液。最常見的一種是10 mM磷酸鹽緩沖液，pH 7.4，0.9％的磷酸鹽緩沖液（PBS）。PBS-T（PBS + 0.1％Tween 20） √ 一抗工作液：根據(jù)供應(yīng)商提供的稀釋比例。 √ 阻斷血清和多聚HRP山羊抗兔Ig G：即用型 √ DAB工作溶液（1ml）：在EP管中混勻50ul試劑A，50ul試劑B和900ul DAB底物。使用時(shí)，最好在20分鐘內(nèi)使用DAB工作溶液 √ 配置表
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| 試劑： |
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| 免疫組化染色介紹： | 菲恩生物采用了新的聚合酶標(biāo)記系統(tǒng)（多聚HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG）。更多的酶將通過臂結(jié)構(gòu)連接至一個(gè)抗體。同時(shí)，新系統(tǒng)的理想結(jié)構(gòu)增強(qiáng)了免疫化學(xué)過程中的信號(hào)，減少了實(shí)驗(yàn)步驟。 | ||||||||||||||||||||
| 石蠟切片的染色步驟： | 1.通過二甲苯或其他清潔劑和分級(jí)酒精系列對(duì)組織切片進(jìn)行脫蠟和水化處理。
2.在自來水中沖洗5分鐘。 3.如果需要淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性，則將切片在0.3％H2O2的甲醇或水中孵育30分鐘。通過使用更高濃度的H2O2可以縮短孵育時(shí)間。如果內(nèi)源性過氧化物酶活性沒有問題，則可以刪除步驟3。 4.在緩沖液中洗滌5分鐘。 5.在37℃下用封閉血清孵育切片1小時(shí) 6.從切片上吸干多余的阻斷血清。 7.將一抗在PBS緩沖液中稀釋，在37℃下孵育切片1小時(shí)，在4℃下過夜孵育。（如果發(fā)生背景染色，則可以在含有0.1％BSA的緩沖液中稀釋一抗，請(qǐng)參見注釋3、5） 8.在PBST緩沖液中洗滌載玻片3分鐘。 9.將切片與多HRP山羊抗兔Ig G在37℃孵育1小時(shí)。 10.在PBST緩沖液中洗滌載玻片3分鐘。 11.在DAB工作液中孵育切片，直到形成所需的染色強(qiáng)度。（見注2） 12.用自來水沖洗切片。 13.復(fù)染，清洗并封片。 | ||||||||||||||||||||
| 注意事項(xiàng)： | 1.不應(yīng)使用含有疊氮化鈉或其他過氧化物酶活性抑制劑的溶液。
2.顯影時(shí)間可能會(huì)因抗原水平，所需染色劑的強(qiáng)度或所用底物而異。DAB一般應(yīng)顯色2-10分鐘；AEC 10-30分鐘；TMB 5-20分鐘。由于反應(yīng)產(chǎn)物的溶解性或缺乏色彩對(duì)比，某些復(fù)染可能與某些過氧化物酶底物不兼容?？筛鶕?jù)要求提供復(fù)染色兼容性表。 3.僅應(yīng)使用免疫組化等級(jí)BSA，因?yàn)槠渌苿┛赡芎胁恍枰碾s質(zhì)。稀釋這些試劑可能需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間和/或更高的孵育溫度，以實(shí)現(xiàn)最大的靈敏度。 4.該部分應(yīng)做好準(zhǔn)備。固定（通常在甲醛含量不超過4％的福爾馬林緩沖液中）應(yīng)在整個(gè)染色過程中保持切片的完整性，但又不至于破壞所研究的抗原。在染色過程中，請(qǐng)勿使切片變干。使用加濕箱進(jìn)行孵育。 5.為了避免抗體吸附到最終稀釋的塑料或玻璃容器中，可以將初級(jí)抗體稀釋在含有0.1％免疫組化級(jí)牛血清白蛋白的緩沖液中。 6.孵育時(shí)間可能會(huì)縮短。如果切片中的抗原濃度較高，建議與一抗，二抗和DAB試劑的孵育時(shí)間會(huì)減少。如果抗原濃度低，則可以延長(zhǎng)步驟7和9以實(shí)現(xiàn)最大程度的染色。 |
