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發(fā)布時(shí)間：2020-10-15 11:46?? 咨詢量：
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產(chǎn)品詳情
| 名稱： | Total Antioxidant Capacity Assay Kit (FRAP) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 介紹： | √ 活性氧(Reactive oxygen species,ROS)主要包括羥基自由基、超氧自由基和過氧化氫。在細(xì)胞或組織的正常生理代謝過程中會(huì)產(chǎn)生活性氧，同時(shí)一些環(huán)境因子例如紫外照射、γ射線照射、吸煙、環(huán)境污染等也可以誘導(dǎo)活性氧的產(chǎn)生?；钚匝醍a(chǎn)生后，可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂、蛋白和DNA等的氧化損傷，誘發(fā)氧化應(yīng)激(Oxidative stress)，繼而導(dǎo)致各種腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、肝損傷、以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。
機(jī)體中存在多種抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除體內(nèi)產(chǎn)生的各種活性氧，以阻止活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激(oxidative stress)的產(chǎn)生。一個(gè)體系內(nèi)的各種抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的總的水平即體現(xiàn)了該體系內(nèi)的總抗氧化能力。因此測(cè)定血漿、血清、尿液、唾液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液中的總抗氧化能力具有非常重要的生物學(xué)意義。 √ 植物或中草藥抽提液、或各種抗氧化物溶液的總抗氧化能力的檢測(cè)可以用于檢測(cè)各種溶液的抗氧化能力的強(qiáng)弱，可以用于篩選強(qiáng)抗氧化能力的藥物。 FRAP法測(cè)定總抗氧化能力的原理是酸性條件下抗氧化物可以還原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ，隨后在593nm測(cè)定藍(lán)色的Fe2+-TPTZ即可獲得樣品中的總抗氧化能力。由于反應(yīng)在酸性條件下進(jìn)行，可以抑制內(nèi)源性的一些干擾因素。并且由于血漿等樣品中的鐵離子或亞鐵離子的總濃度通常低于10μM，因此血漿等樣品中的鐵離子或亞鐵離子不會(huì)顯著干擾FRAP法的檢測(cè)反應(yīng)。由于反應(yīng)體系中的鐵離子或亞鐵離子是和TPTZ螯合的，樣品本身含有的少量金屬離子螯合劑通常也不會(huì)顯著影響檢測(cè)反應(yīng)。 √ 抗氧化劑 Fe3 + -TPTZ ——————> Fe2 + -TPTZ（藍(lán)色） √ 該試劑盒的抗氧化能力與Trolox相當(dāng)。Trolox是一種水溶性維生素E類似物，可作為抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 貨號(hào)： | K025 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 存儲(chǔ)： | 該套件使用冰袋運(yùn)輸，建議在-20℃下保存。保質(zhì)期為12個(gè)月，避光。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 套件組分： | 在打開之前，將小瓶短暫離心。使用超純水制備試劑。為了保持試劑的完整性，請(qǐng)避免重復(fù)冷凍/融化循環(huán)。
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| 操作步驟： | 1.向所有標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔中添加180ul FABP工作溶液。
2.分裝5ul 0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM標(biāo)準(zhǔn)溶液到標(biāo)準(zhǔn)孔中。 3.加入5ul 的ddH 2 O或PBS到對(duì)照（零）孔中。 4.加入5ul 0.15-1.5mMTrolox到樣品孔中作為陽性對(duì)照; 將每個(gè)樣品5ul 加入其他樣品孔中。 5.用蓋密封板并在37°C下孵育3-5分鐘。在593 nm（A593）處測(cè)量吸光度。如果難以測(cè)量A593，則可以在585-605nm范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)量。 6.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的總抗氧化能力。如果樣品的吸光度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線，則應(yīng)稀釋樣品然后測(cè)定。 7.對(duì)于FRAP方法，總抗氧化能力用FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度表示。例如，如果血漿或血清樣品的吸光度與1mM FeSO4的吸光度相同，則血漿或血清樣品的總抗氧化能力為1mM；如果細(xì)胞勻漿的測(cè)定吸光度與0.3mM FeSO4的吸光度相同，并且蛋白質(zhì)濃度為0.15mg/ml，則細(xì)胞勻漿樣品的總抗氧化能力為0.3mM/0.15mg/ml，即2mmol/g；如果測(cè)得的0.2mM抗氧化劑的吸光度與1mM FeSO4的吸光度相同，則相對(duì)總抗氧化劑容量為5。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 程序： | 所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)一式雙份操作。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| FRAP工作溶液的制備： | 請(qǐng)參考下表，根據(jù)要測(cè)量的樣品數(shù)量（包括標(biāo)準(zhǔn)曲線）來制備適量的FRAP工作溶液：
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| 比色檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)： | √ 取試劑盒提供的27.8 mg FeSO4?7H2O，溶解并保持體積為1 ml，此時(shí)FeSO4?7H2O的濃度為100 mM。然后用PBS將100 mM FeSO4?7H2O稀釋至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。
√ FeSO4溶液應(yīng)新鮮配制。100mM FeSO4溶液易于氧化為三價(jià)鐵，使顏色從最初的淺綠色逐漸變?yōu)闇\黃色。如果顏色是黃色，則放棄并重新配制溶液。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 樣品制備： | 1.血清，血漿，唾液，尿液和培養(yǎng)基樣品可以直接添加到孔中。對(duì)于血漿樣品，建議使用肝素或檸檬酸鈉而不是EDTA進(jìn)行抗凝。根據(jù)文獻(xiàn)，人血清或血漿的總抗氧化能力為0.5-2mM，唾液為0.3-1mM，尿液為0.2-3mM。
2.對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，可以將制備的細(xì)胞或組織樣品的上清液直接添加到孔中。同時(shí)，應(yīng)測(cè)試蛋白質(zhì)濃度。最終確定的總抗氧化劑容量通常表示為每克或每微克蛋白質(zhì)的總抗氧化劑容量，單位為mmol / mg或mmol / g。 3.對(duì)于其他樣品，可以將植物提取物或中草藥提取物直接添加到孔中，總抗氧化劑容量可以表示為mmol / mg或mmol / g。如果抗氧化劑的濃度可以表示為摩爾濃度，則所測(cè)量的總抗氧化劑容量可以通過相對(duì)總抗氧化劑容量來表示。例如，測(cè)得的0.5mM抗氧化劑的吸收度與1mM FeSO4的吸收度相同，相對(duì)總抗氧化劑容量為2。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
