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發(fā)布時(shí)間：2020-10-15 11:46?? 咨詢量：
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產(chǎn)品詳情
| 名稱： | Quick PCR Purification and Gel Extraction Kit | |||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 介紹： | 菲恩生物快速試劑盒是PCR反應(yīng)設(shè)計(jì)，從標(biāo)準(zhǔn)或低濃度瓊脂糖凝膠中提取70bp至10kb的高質(zhì)量DNA，用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。每個(gè)旋轉(zhuǎn)柱最多可處理400mg瓊脂糖凝膠。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 貨號(hào)： | K004 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 存儲(chǔ)： | 菲恩生物快速試劑盒應(yīng)在室溫（15-25℃）下干燥存放。在這種情況下，菲恩生物快速試劑盒可以保存長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月，而性能和質(zhì)量均不會(huì)降低。使用前檢查緩沖液是否沉淀，必要時(shí)在37°C溶解。整個(gè)試劑盒可保存在2至8°C，但在這種情況下，應(yīng)在使用前重新溶解緩沖液。使用時(shí)，請(qǐng)確保所有緩沖液和離心柱均處于室溫。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 套件組分： |
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| 原理： | 菲恩生物快速試劑盒將旋轉(zhuǎn)柱技術(shù)的便利性與獨(dú)特設(shè)計(jì)的硅膠膜的選擇性粘合的性能結(jié)合在一起。試劑盒中的緩沖液經(jīng)過特殊優(yōu)化，可在每種特定應(yīng)用中有效回收DNA并去除污染物。在高濃度鹽存在下，DNA吸附到硅膠膜上，而污染物則通過色譜柱。有效去除雜質(zhì)，并用TE緩沖液或純凈水洗脫DNA。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 安全事項(xiàng)： | 使用化學(xué)藥品時(shí)，請(qǐng)始終穿著實(shí)驗(yàn)服，一次性手套和護(hù)目鏡。
緩沖劑PB含有鹽酸胍，與漂白劑結(jié)合后可形成強(qiáng)氧化性化合物。如果濺到了含有該緩沖液的液體，請(qǐng)用實(shí)驗(yàn)室清潔劑和水清洗。如果溢出的液體含有潛在的傳染源，請(qǐng)先用實(shí)驗(yàn)室清潔劑和水清潔患處，然后再用1％（v / v）的次氯酸鈉清潔。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 程序： | 1.要進(jìn)行PCR純化，請(qǐng)?jiān)?份PCR樣品中加入5份PB緩沖液并混合。例如，將500 μl的PB緩沖液添加到100 μl的PCR樣品中。然后執(zhí)行步驟3。
2.要進(jìn)行凝膠提取，請(qǐng)用干凈，鋒利的手術(shù)刀從瓊脂糖凝膠上切除DNA片段。在無色試管中稱量凝膠切片。將3體積的Buffer QG加到1體積的凝膠中（100 mg?100 μl）。對(duì)于> 2％的瓊脂糖凝膠，添加6體積的Buffer QG。每列的最大凝膠切片量為400 mg。 在50°C下孵育1 0分鐘（或直到凝膠切片完全溶解）。為了幫助溶解凝膠，請(qǐng)?jiān)诜跤^程中每2-3分鐘渦旋離心管進(jìn)行混合。 重要提示：完全溶解瓊脂糖。對(duì)于> 2％的凝膠，請(qǐng)?jiān)黾臃跤龝r(shí)間。 凝膠切片完全溶解后，向樣品中加入1凝膠體積的異丙醇并混合，然后進(jìn)行步驟3。 3.將離心柱放在隨附的2 ml收集管中。 4.要結(jié)合DNA，將樣品應(yīng)用于色譜柱并離心30-60 s。 5.丟棄流通。將色譜柱放回同一管中。 對(duì)于凝膠提取，建議：將0.5 ml Buffer QG加入柱中并離心1分鐘。此步驟將除去所有痕量的瓊脂糖。純化的DNA用于直接測(cè)序，體外轉(zhuǎn)錄或顯微注射時(shí)才需要進(jìn)行此步驟。 6.要洗滌，請(qǐng)?jiān)谏V柱中加入0.75 ml Buffer PE，并離心30–60 s。 7.丟棄流通液，然后將色譜柱放回同一管中。將色譜柱再離心1分鐘。重要提示：除非在此步驟前將離心處理前的流出物丟棄，否則緩沖液PE中的殘留乙醇將無法完全去除。 8.將色譜柱放入干凈的1.5 ml微量離心管中。 9.要洗脫DNA，在柱膜中心添加50 μl EB緩沖液（1 0 mM Tris?HCl，pH 8.5）或水（pH 7.0-8.5），靜置1分鐘，然后離心分離1分鐘。重要：確保將洗脫緩沖液直接分配到柱膜上，以完全洗脫結(jié)合的DNA。洗脫效率取決于pH。在pH 7.0和8.5之間達(dá)到最大洗脫效率。使用水時(shí)，請(qǐng)確保pH值在此范圍內(nèi)，并將DNA儲(chǔ)存在-20°C，因?yàn)樵跊]有緩沖劑的情況下DNA可能降解。純化的DNA也可以在TE緩沖液（1 0 mM Tris?HCl，1 mM EDTA，pH 8.0）中洗脫，但是EDTA可能會(huì)抑制隨后的酶促反應(yīng)。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| 故障排除指南： |
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