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發(fā)布時間：2020-10-15 11:44?? 咨詢量：
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產(chǎn)品詳情
| 名稱： | Plasmid Purification Kit | |||||||||||||||||||||||||||
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| 介紹： | 菲恩生物質(zhì)粒純化試劑盒旨在提取高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA，用于真核生物轉(zhuǎn)染和體外表達的分子生物學(xué)實驗。該試劑盒基于SDS堿性裂解方法，并通過使用硅膠膜結(jié)合柱為提取和純化提供了快速操作。使用該試劑盒，可以在不到1小時的時間內(nèi)分離出質(zhì)粒DNA，其純度為A260 / A280> 1.86，從而大大減少了提取時間并實現(xiàn)了高純度。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 貨號： | K003 | |||||||||||||||||||||||||||
| 存儲： | 1.回收柱CM應(yīng)干燥保存，并應(yīng)在室溫（15-25℃）下使用。它們可以保存至少2年，而不會降低性能、容量或分離質(zhì)量。
2.菲恩生物的質(zhì)粒試劑盒應(yīng)在室溫下保存。加入RNase A后，緩沖液P1應(yīng)在2-8℃下保存，并穩(wěn)定6個月。其他緩沖液和RNase A儲備溶液可以在室溫下保存2年。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 套件組分： |
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| 操作步驟： | 1.將1.5 ml培養(yǎng)物添加到離心管中，并以12,000 rpm離心1分鐘，并棄去上清液。
2.向離心管中加入250ul 緩沖液P1（包括RNase A）并重懸細菌細胞。注意：重懸沉淀后，確保沒有細胞團可見。 3.向離心管中加入250ul 緩沖液P2。輕輕倒轉(zhuǎn)試管6至8次進行混合。注意：必須輕柔地進行第3步，否則基因組DNA可能會破裂。如有必要，可將離心管倒轉(zhuǎn)6次以上直至溶液澄清，并確保將反應(yīng)時間限制在5分鐘以內(nèi)。 4.加入350ul 緩沖液N3。蓋上蓋子并輕輕顛倒6至8次進行混合。 5.將試管以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，然后會出現(xiàn)白色球形顆粒。 6.將上清液轉(zhuǎn)移到柱收集管中，并以12,000 rpm離心柱收集管1分鐘，然后丟棄過濾后的溶液。 7.用PB Buffer清洗色譜柱收集管。向柱收集管中添加500ul PB緩沖液，并以12,000 rpm離心30至60秒，然后棄去過濾的溶液。 8.用PE緩沖液清洗色譜柱收集管。向柱收集管中添加750ul PE緩沖液，并以12,000 rpm離心30至60秒，然后棄去過濾的溶液。 9.重復(fù)步驟8，再次清洗色譜柱收集管。 10.消除殘留的PE緩沖液。將步驟9的色譜柱收集管在12,000 rpm的轉(zhuǎn)速下離心2分鐘，然后將色譜柱打開蓋并暴露在空氣中5分鐘以揮發(fā)PE緩沖液。注意：殘留的PE緩沖劑可能會抑制后續(xù)反應(yīng)并導(dǎo)致提取失敗。 11.將離心柱轉(zhuǎn)移到透明的離心管中。要洗脫DNA，請在柱膜中央添加50-100 μl EB緩沖液（1 0 mM Tris?Cl，pH 8.5）或水（pH 7.0–8.5），將柱靜置1分鐘，然后離心。柱1分鐘。重要：確保將洗脫緩沖液直接分配到柱膜上，以完全洗脫結(jié)合的DNA。洗脫效率取決于pH。在pH 7.0和8.5之間達到最大洗脫效率。使用水時，請確保pH值在此范圍內(nèi)，并將DNA儲存在-20°C，因為在沒有緩沖劑的情況下DNA可能降解。純化的DNA也可以在TE緩沖液（10 mM Tris?Cl，1 mM EDTA，pH 8.0）中洗脫，但是EDTA可能會抑制隨后的酶促反應(yīng)。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 原理： | 菲恩生物質(zhì)粒純化方案基于改良的堿裂解程序，然后在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下將質(zhì)粒DNA與樹脂結(jié)合。RNA，蛋白質(zhì)，染料和低分子量雜質(zhì)可通過中鹽洗滌去除。質(zhì)粒DNA在高鹽緩沖液中洗脫，然后濃縮并通過異丙醇沉淀脫鹽。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 產(chǎn)量的確定： | 為了確定產(chǎn)量，應(yīng)該通過260 nm的紫外分光光度法和瓊脂糖凝膠上的定量分析來確定DNA濃度。為了進行可靠的分光光度法DNA定量，A260讀數(shù)應(yīng)介于0.1和1.0之間。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 瓊脂糖凝膠分析： | 我們建議在純化過程中取出并保存等分試樣。如果質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量或質(zhì)量較低，則可以通過瓊脂糖凝膠電泳對樣品進行分析，以確定出現(xiàn)問題的純化步驟。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 安全事項： | 使用化學(xué)藥品時，請始終穿著實驗服，一次性手套和護目鏡。 | |||||||||||||||||||||||||||
| 故障排除指南： |
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